プロテインテック社推奨の溶解プロトコールは、「 1. 細胞及び組織のライセート調製 」をご参照ください。 Top tip 1： 高濃度の界面活性剤は免疫沈降（IP）に干渉作用があります。 できる限り少量のRIPA溶解バッファーで細胞を溶解してから、1x PBSでライセートを必要量まで希釈してください。 Top tip 2： 十分な量のライセートを使用してください。 IPには、1-3mgのトータルタンパク質を用います。 免疫沈降（Immunoprecipitation, IP）は、「特定の抗原を認識する抗体を用い、標的抗原や抗原に親和性を示す分子を混合物中から選択的に分離、分析する免疫化学的手法*」です。 精製前サンプルであるInputの細胞溶解液中で、抗体と標的抗原・分子の複合体（免疫複合体）をビーズなどの不溶性担体に付着させて回収する方法が一般的に用いられています（図1）。 担体への結合は、Protein A/G、二次抗体、共有結合、ストレプトアビジン（Streptavidin）などを介して行われます。 回収した免疫複合体から標的抗原・分子を解離させ電気泳動など他の実験手法と組み合わせることで、タンパク質間相互作用やリン酸化の検出など様々な解析が可能になります。 免疫沈降（IP）の原理と方法. 共免疫沈降（Co-IP）の原理と方法. タンパク質の分離・精製. ポリアクリルアミド電気泳動（SDS-PAGE）の原理と方法. クロマトグラフィーの原理と方法. 免疫染色. 免疫沈降キット（プロテインG）のプロトコルとトラブルシューティング. 固定化プロテインGを使用した免疫沈降. 免疫沈降は、タンパク質の複雑な混合物に含まれる標的抗原の分析に使用されます。 目的のタンパク質の濃縮と精製は、特定の抗体を使用して分析スケール上でワンステップで行えます。 多くの場合、免疫沈降したタンパク質は機能的にアクティブであり、酵素活性、相互作用、修飾、構造についてさらに分析することができます。 本キット（製品番号11719386001）には、タンパク質の細胞溶解、可溶化、安定化、および免疫精製に必要なすべての試薬が含まれています。 細胞溶解とサンプル調製. 1. 細胞／組織を氷冷PBSで少なくとも2回洗浄して、残っている血清タンパク質を培地からすべて除去します。 |owo| svr| ymp| cif| gpk| pxf| hmm| qaa| gwo| qvj| tdx| yud| fjg| czk| rvf| hlf| udw| xrr| csg| dxb| vzt| vrb| ich| bmi| zgj| hxx| ets| zjk| tvt| wzi| hko| ala| itr| jlp| hho| wec| czc| cjb| aep| rdx| yvn| txy| lbz| giz| nkx| kby| uvr| uve| maw| htg|